從2018年-2019年的m6A相關(guān)基金已經(jīng)可以看出,短短一年多的時(shí)間,m6A的研究主題已經(jīng)從圖譜轉(zhuǎn)向機(jī)制,尤其是腫瘤,心血管,免疫,干細(xì)胞這四個(gè)領(lǐng)域,簡(jiǎn)單的圖譜已經(jīng)無(wú)法打動(dòng)基金審核的專家。圖譜+機(jī)制的組合研究方案基本上已經(jīng)是這幾個(gè)領(lǐng)域5分以上文章的標(biāo)配,今天小編就帶大家閱讀一篇眼科腫瘤的m6A文章,近期發(fā)表在Molecular Cancer雜志上,設(shè)計(jì)經(jīng)典,思路清晰,一起來(lái)學(xué)習(xí)一下10分左右m6A文章的經(jīng)典研究思路吧。
? 研究目標(biāo):脈絡(luò)膜黑色素瘤
? 研究團(tuán)隊(duì):上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第九人民醫(yī)院眼科范先群教授課題組與北京中科院基因所楊運(yùn)桂教授課題組合作
? 期刊: Molecular Cancer(IF=10.679)
主要研究結(jié)果:
除了提供m6A修飾整體水平定量,m6A圖譜測(cè)序,m6A修飾目的基因表達(dá)水平定量服務(wù),
天昊為您的m6A研究思路做個(gè)小總結(jié):
5分以下
思路:2個(gè)組別, RNA測(cè)序+ m6A-seq,確定m 6A整體水平差異,整體匯報(bào) m6A-seq的修飾圖譜,并且羅列差異表達(dá)基因和差異修飾基因??赡苄枰?span>qpcr驗(yàn)證找到的差異基因。
5-8分
思路:2個(gè)組別,RNA測(cè)序+ m6A-seq,確定m6A整體水平差異,整體匯報(bào) m6A-seq的修飾圖譜,并且羅列差異表達(dá)基因和差異修飾基因。通過(guò)關(guān)鍵甲基化酶的細(xì)胞或動(dòng)物敲降或過(guò)表達(dá),結(jié)合后續(xù)的RNA表達(dá)譜或RNAseq數(shù)據(jù)變化,來(lái)確定受m6A調(diào)控表達(dá)的靶基因list;結(jié)合pcr驗(yàn)證部分靶基因。最好有臨床數(shù)據(jù)結(jié)合分析。
10分左右
思路:除了完成基礎(chǔ)的內(nèi)容,比較關(guān)鍵是確定一個(gè)真正參與疾病,并且受m6A修飾調(diào)控的靶基因。核心內(nèi)容包括4各方面:首先要將甲基化酶敲除或者過(guò)表達(dá),體現(xiàn)關(guān)鍵甲基化酶表達(dá)變化對(duì)疾病表型的影響;其次要通過(guò)m6A圖譜測(cè)序和RNA測(cè)序?qū)ふ乙粋€(gè)真正參與疾病,并且受m6A修飾調(diào)控的靶基因,并且后續(xù)要利用功能試驗(yàn)證明靶基因真的與m6A修飾酶結(jié)合并受m6A修飾酶調(diào)控;最后需要將靶基因敲除或者過(guò)表達(dá),體現(xiàn)這個(gè)關(guān)鍵靶基因表達(dá)變化對(duì)疾病表型的影響。