天昊擴(kuò)增子絕對(duì)定量測(cè)序全面升級(jí)，強(qiáng)勢(shì)助力微生態(tài)定量研究

發(fā)稿時(shí)間：2019-03-07來(lái)源：天昊生物

上一篇我們已經(jīng)淺談了微生物絕對(duì)定量VS相對(duì)定量的優(yōu)越性，其中多篇文獻(xiàn)已經(jīng)證明只有絕對(duì)定量分析才能反映樣本每種微生物的真實(shí)數(shù)量和組間樣本的真實(shí)差異，因此絕對(duì)定量才是進(jìn)行微生態(tài)研究的首選。我司于去年下半年推出微生物16S擴(kuò)增子絕對(duì)定量測(cè)序技術(shù)以來(lái)，受到醫(yī)學(xué)腸道和環(huán)境微生物領(lǐng)域老師同學(xué)們的廣泛歡迎和好評(píng)。經(jīng)過我司研究人員的不懈努力，微生物16S擴(kuò)增子絕對(duì)定量測(cè)序成功實(shí)現(xiàn)“跨越式”升級(jí)！

全新分析流程

一套測(cè)序數(shù)據(jù)同時(shí)進(jìn)行絕對(duì)定量分析和相對(duì)定量分析，用接近常規(guī)擴(kuò)增子測(cè)序的價(jià)格同時(shí)得到兩套數(shù)據(jù)，性價(jià)比超高！

全面分析內(nèi)容

結(jié)題報(bào)告提供的絕對(duì)定量和相對(duì)定量分析結(jié)果都同時(shí)覆蓋OTU分類分析、群落組成分析、Alpha多樣性分析、Beta多樣性分析等常規(guī)分析板塊，得到的兩套結(jié)果相互對(duì)比，相互補(bǔ)充，從而打破常規(guī)擴(kuò)增子測(cè)序技術(shù)文章套路，建立文章思路新標(biāo)準(zhǔn)！ 

Demo數(shù)據(jù)證明絕對(duì)定量必要性

購(gòu)買標(biāo)準(zhǔn)混合菌株DNA（其中不同菌的比例是固定的），并將其標(biāo)化至10ng/ul：（1）向標(biāo)準(zhǔn)混合菌株DNA（微生物DNA占比100%）中添加外標(biāo)序列，樣本編號(hào)為1-1、1-2與1-3；（2）將標(biāo)準(zhǔn)混合菌株DNA與hela細(xì)胞基因組DNA按照質(zhì)量比1:9的比例混合，混合后DNA標(biāo)化至10ng/ul（微生物DNA占比10%），然后向其中添加外標(biāo)序列，樣本編號(hào)為2-1、2-2與2-3；（3）將標(biāo)準(zhǔn)混合菌株DNA與hela細(xì)胞基因組DNA按照質(zhì)量比0.1:9.9的比例混合，混合后DNA標(biāo)化至10ng/ul（其中微生物DNA占比1%），然后向其中添加外標(biāo)序列，樣本編號(hào)為3-1、3-2與3-3。不同組別吸取同樣體積，然后用天昊微生物16S擴(kuò)增子絕對(duì)定量測(cè)序技術(shù)對(duì)上述3組樣品菌群結(jié)構(gòu)進(jìn)行檢測(cè)，不同樣本總測(cè)序量相當(dāng)。

結(jié)果發(fā)現(xiàn)當(dāng)不同組別樣本微生物總量（微生物總量比值為100:10:1）存在現(xiàn)實(shí)差異時(shí)，相對(duì)定量分析和絕對(duì)定量分析得到截然不同的分析結(jié)果。（1）相對(duì)定量分析得到的結(jié)論是：不同組別樣本的菌群沒有顯著差異，即不同組別樣本特定菌屬的相對(duì)豐度（相對(duì)比例）相似。（2）而絕對(duì)定量分析得到的結(jié)論是：與理論預(yù)測(cè)值相符，不但不同組別樣本微生物總量（總拷貝數(shù)）差異巨大，并且同一菌屬在不同組別的絕對(duì)豐度（絕對(duì)拷貝數(shù)）差異也十分巨大。

這個(gè)Demo數(shù)據(jù)結(jié)果說(shuō)明如果樣本間微生物總量本身存在差異，使用傳統(tǒng)相對(duì)定量分析會(huì)造成錯(cuò)誤的研究結(jié)論，所以，為了得到樣本間細(xì)菌群落的真實(shí)變化結(jié)果，微生態(tài)的研究必須用絕對(duì)定量分析替代傳統(tǒng)的相對(duì)定量分析。

以上就是天昊16S擴(kuò)增子絕對(duì)定量測(cè)序部分更新內(nèi)容和亮點(diǎn)，當(dāng)然我們也會(huì)繼續(xù)升級(jí)有應(yīng)用價(jià)值的分析內(nèi)容，感興趣的小伙伴們可以關(guān)注天昊生物微信公眾號(hào)，小編會(huì)不定期更新哦。