高通量連接探針擴增技術(HLPA)在流產(chǎn)物中的應用
發(fā)稿時間：2018-11-27來源：天昊診斷
“中華醫(yī)學會雜志社指南與進展巡講（產(chǎn)科）”會議于2018年 11 月24-25日在蘇州隆重召開，邀請國內(nèi)知名產(chǎn)科專家對涉及產(chǎn)科相關疾病的最新診療進展、臨床實用類知識和技術等進行討論，加強中、基層醫(yī)院的臨床醫(yī)生對產(chǎn)科相關疾病診療的認識和學習，為我國產(chǎn)科疾病治療提供了規(guī)范性指導建議以及樹立方向標。
大會期間，蘇州大學附屬第一醫(yī)院婦產(chǎn)科主任陳友國教授介紹了了一項由天昊基因科技（蘇州）有限公司研發(fā)的新技術-高通量連接探針擴增技術 (CNVplex?)，并且分享了該技術在蘇大附一院其科室使用后的一些心得體會并闡述了將該技術的優(yōu)勢及其在自然流產(chǎn)原因查找中的臨床受益等。
高通量連接探針擴增技術(HLPA)
1、檢測原理
采用連接酶高特異性連接反應對目的區(qū)域進行雜交、連接，通過專利技術在連接探針末段引入不同長度的標簽序列獲得長度各異的目的探針連接產(chǎn)物，利用熒光標記的通用引物對連接產(chǎn)物進行PCR擴增，通過熒光毛細管電泳對擴增產(chǎn)物進行電泳分離檢測，最后通過對電泳圖譜的分析獲取各個位點的峰高，進而對樣品目的區(qū)域的拷貝數(shù)進行分析。
（圖1 HLPA檢測原理 ）
2、檢測優(yōu)勢
? 通量高：可同時實現(xiàn)48-480個區(qū)段拷貝數(shù)快速檢測，檢測效率大大增加。
? 準確性高：基于高特異性的連接原理，檢測區(qū)域連接產(chǎn)物采用通用引物擴增，擴增效率基本一致，平均檢測CV<10%。
? 分辨率高：可對6拷貝以內(nèi)的片段進行準確定量。
? 重復性高：檢測穩(wěn)定性高，節(jié)約樣品復孔的檢測費用。
? 快速高效：使用的探針短，可以直接合成，無需克隆制備，更快。
高通量連接探針擴增技術（CNVplex?）具有通量高、檢測速度快、準確度高及價格低等優(yōu)勢，一經(jīng)上市就受到業(yè)界的廣大好評。在上海國際婦女和平婦幼保健院發(fā)表的一篇關于CNVplex?技術用于流產(chǎn)物檢測的文章中提到，CNVplex?對于流產(chǎn)物的檢測結果與aCGH的結果完全一致，因此該技術可作為自然流產(chǎn)后有效的篩查方式。天昊基因目前有二款產(chǎn)品可對流產(chǎn)組織進行檢測，分別是染色體非整倍體基因檢測和染色體微缺失微重復突變檢測。
√ 染色體非整倍體基因檢測
共設計有170對探針，分布在24條染色體的著絲粒兩側及染色體末端約0Mb, 10Mb, 20Mb處進行探針設計，平均每條染色體覆蓋5-8條。該體系可用于檢測每條染色體靶定區(qū)域的拷貝數(shù)情況，以及染色體的末端缺失或重復。
（圖2 染色體非整倍體基因檢測探針位置分布圖 ）
√ 染色體微缺失微重復突變檢測
共設計有1431對探針，覆蓋了24條染色體的200個核心區(qū)域以及核心區(qū)域兩側一定范圍區(qū)域、所有染色體著絲粒兩側和兩端染色體離末端約0Mb, 10Mb, 20Mb處區(qū)域、以及3個突變位點（RBM8A ：c.67+32G>C, c.-21delG; FGFR3：c.1138G>A），可對DECIPHER認定的70個綜合征對應區(qū)域缺失重復或點突變位點，ISCA數(shù)據(jù)庫中所有被至少4個先天系統(tǒng)性發(fā)育異常以及智力發(fā)育遲緩高風險CNV區(qū)段覆蓋的區(qū)域的缺失重復，以及所有染色體非整倍體及染色體末端缺失重復進行檢測。因此，該體系可用于檢測每條染色體拷貝數(shù)情況，以及對染色體的微缺失微重復也能進行檢測。
（圖2 染色體微缺失微重復突變檢測探針位置分布圖 ）
陳主任在會上強烈建議，流產(chǎn)后能取到胚胎絨毛的首選流產(chǎn)絨毛的染色體檢測，理由有以下幾點：
1、 由于孕早期自然流產(chǎn)中胚胎染色體異常所致的流產(chǎn)約占50%-70%，因此，自然流產(chǎn)后先進行流產(chǎn)胚胎的絨毛染色體檢測是最有可能快速找到流產(chǎn)原因的篩查方法。
若自流流產(chǎn)后不先進行流產(chǎn)胚胎染色體檢測，而是先進行子宮，免疫，內(nèi)分泌，感染等方面的檢查，能真正查出是這類原因?qū)е碌牧鳟a(chǎn)約不到20%。因此，根本無法解決臨床的需求。另外，流產(chǎn)胚胎如果未經(jīng)檢測就直接丟棄，就有可能丟失先證者，而無法查出真正的流產(chǎn)病因。所以，無論是胎停或復發(fā)性流產(chǎn)，對于各種妊娠失敗，如果條件允許時，均應對流產(chǎn)物絨毛或胚胎或胎兒進行必要的分子診斷。建議流產(chǎn)物絨毛應送檢行染色體CNV檢測。
2、可以及時發(fā)現(xiàn)父母的染色體問題，采取合適的生育方式，避免反復性流產(chǎn)的發(fā)生，避免多次流產(chǎn)錯過合適的生育時機，給婦女及家庭造成巨大的精神壓力。
通過流產(chǎn)絨毛染色體檢測的不同結果類型，可反推出是胚胎自發(fā)突變導致的染色體異常還是由于父母是染色體異常攜帶者導致的胚胎染色體異常。從結果可反推出多種父母染色體異常攜帶者的類型如：平衡易位、羅伯遜易位、倒位等。
3、如果每次流產(chǎn)的胚胎染色體異常并不是都一樣，而是存在多個染色體問題，可查找夫妻雙方是否存在減數(shù)分裂相關的基因突變。
4、隨著現(xiàn)代基因檢測技術的進步，新技術、新方法層出不窮被逐漸應用于臨床，檢測費用也在不斷降低，絕大部分普通家庭都可以承受。
基于以上這些原因，越來越多的專家認為流產(chǎn)后進行胚胎絨毛染色體分析對于臨床是非常有必要的，流產(chǎn)胚胎絨毛的檢測不僅能為臨床評估孕婦下一次的流產(chǎn)風險，提供遺傳建議及治療方案，還能在一定程度上減輕流產(chǎn)孕婦緊張焦慮的情緒，有助于下一次的備孕。而天昊基因的高通量連接探針擴增技術(HLPA)是流產(chǎn)組織檢測的首選。
天昊基因科技（蘇州）有限公司（簡稱“天昊基因”），成立于2008年，位于蘇州工業(yè)園區(qū)生物納米園，天昊基因是一家主要以基因分析技術開發(fā)及應用為主營方向的創(chuàng)新型的高科技生物技術企業(yè)，希望通過自主研發(fā)的創(chuàng)新技術促進國內(nèi)基礎醫(yī)學遺傳研究以及人類各種疑難疾病的致病機理的探索，同時利用這些技術開發(fā)適合臨床應用的各類基因檢測產(chǎn)品，服務于我國人民大眾的健康事業(yè)，并致力于科研相關試劑的研制與開發(fā)工作。其中，天昊基因旗下的天昊生物醫(yī)藥科技（蘇州）有限公司，簡稱天昊診斷，是一家致力于優(yōu)生優(yōu)育診斷和篩查領域的企業(yè)，檢測產(chǎn)品涵蓋了孕前、產(chǎn)前、新生兒等不同階段的出生檢測，以求逐步降低出生缺陷的發(fā)生率。檢測產(chǎn)品包括：新無創(chuàng)TM唐氏綜合征產(chǎn)前篩查、染色體非整倍體基因檢測、染色體微缺失微重復突變檢測、男性不育相關基因突變檢測、遺傳性耳聾90項基因突變檢測、孕前夫婦基因突變攜帶者篩查、新生兒遺傳病基因篩查以及一些罕見的遺傳病檢測（包括：地中海貧血、血友病、假肥大型肌營養(yǎng)不良等）。天昊診斷將以“創(chuàng)新基因科技，引領診斷革新”為宗旨，利用公司各項創(chuàng)新基因檢測技術及高素質(zhì)的服務團隊，為促進分子診斷水平發(fā)展、提升我國人口健康素質(zhì)做出貢獻！
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