CNVplex?采用連接酶高特異性連接反應(yīng)對目的區(qū)域進行雜交、連接,通過專利技術(shù)在連接探針末段引入不同長度的標(biāo)簽序列獲得長度各異的目的探針連接產(chǎn)物,利用熒光標(biāo)記的通用引物對連接產(chǎn)物進行PCR擴增,通過熒光毛細(xì)管電泳對擴增產(chǎn)物進行電泳分離檢測,最后通過對電泳圖譜的分析獲取各個位點的峰高,進而對樣品目的區(qū)域的拷貝數(shù)進行分析確定。
拷貝數(shù)計算:
1)輸出每個峰高數(shù)值(H值),如圖中H(T1), H(R), H(T2)
2)計算各個目標(biāo)區(qū)峰相對參照峰的比值(R值),如R(T1)= H(T1)/ H(R)
3)將檢測樣本的各個目標(biāo)區(qū)R值除以對照樣本的相應(yīng)目標(biāo)區(qū)R值(RR值)再乘以對照樣本該目標(biāo)區(qū)的拷貝數(shù)(通常為2)即獲得檢測樣本各個目標(biāo)區(qū)的拷貝數(shù), 如檢測樣本RR(T1)=0.5,但如果對照樣本RR(T1)=1,而T1在對照樣本中的拷貝數(shù)為2,則檢測樣本數(shù)T1的拷貝數(shù)=0.5/1×2=1
圖1 CNVplex?原理圖
應(yīng)用領(lǐng)域:
本方法適用于各個涉及到DNA拷貝數(shù)變異研究的遺傳研究領(lǐng)域,例如疾病基因組研究、腫瘤基因組研究、臨床分子診斷研究、植物基因組研究、動物基因組研究等。尤其適合針對較大候選區(qū)域、檢測密度要求較高的DNA拷貝數(shù)分析,以及全基因組CNV研究后進行進一步的大樣品驗證研究。
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1) 通量高:可同時實現(xiàn)48-480個區(qū)段拷貝數(shù)快速檢測,檢測效率大大增加。
2) 準(zhǔn)確性高:基于高特異性的連接原理,檢測區(qū)域連接產(chǎn)物采用通用引物擴增,擴增效率基本一致,平均檢測CV<10%。
3) 分辨率高:可對6拷貝以內(nèi)的片段進行準(zhǔn)確定量。
4) 重復(fù)性高:檢測穩(wěn)定性高,節(jié)約樣品復(fù)孔的檢測費用
5) 快速高效:使用的探針短,可以直接合成,無需克隆制備,更快。
檢測對象:
基因組DNA
服務(wù)內(nèi)容:
1. 課題的設(shè)計咨詢包括檢測區(qū)域和候選基因區(qū)域的選擇與探針的鋪設(shè);
2. DNA樣本的質(zhì)檢與標(biāo)化;
3. CNVplex?檢測探針的設(shè)計、合成與優(yōu)化;
4. CNVplex?高通量多重DNA拷貝數(shù)檢測;
5. DNA拷貝數(shù)檢測數(shù)據(jù)的分析與結(jié)果報告。
CNVplex?數(shù)據(jù)結(jié)果準(zhǔn)確和高重復(fù)性
(195個樣本同一目的區(qū)域2個探針檢測結(jié)果)
CNVplex?比Realtime-qPCR具有更準(zhǔn)確的結(jié)果和更高的分辨率
檢測實例